Née le 3 février 1976 à Mascate au sultanat d'Oman où son père travaillait comme banquier pour l'Organisation des Nations unies, de parents écossais, Isla Lang Fisher (son prénom se prononce eye-la) s'installe rapidement avec sa famille en Australie. D'abord à Bathgate en Écosse, avant de déménager à Perth en Australie quand elle avait six ans. Elle a quatre frères.

Passionnée très jeune par la comédie et l'écriture, elle a commencé à apparaître dans des publicités à la télévision australienne à l'âge de neuf ans, avant de jouer dans des séries comme Bay Cove et Paradise Beach. Elle a été scolarisée au Methodist Ladies' College et est apparue dans des rôles de premier plan dans des productions scolaires. À 21 ans, elle étudie à l'École Internationale de Théâtre Jacques Lecoq, dans le 10^e arrondissement de Paris.

Elle est principalement connue pour ses seconds rôles dans la comédie Serial noceurs et le blockbuster Insaisissables.

Elle tient aussi le rôle-titre de la comédie Confessions d'une accro du shopping

Elle a également écrit deux romans à succès durant les années 1990.

Depuis fin 2001, Isla Fisher vit avec le comédien britannique Sacha Baron Cohen (Ali G, Borat), qu'elle rencontre lors d'une fête à Sydney. Ils se fiancent en 2004 et se marient le 15 mars 2010 à Paris. Le couple annonce son divorce en avril 2024 sur les réseaux sociaux. Elle se convertit au judaïsme après trois années d'études, ayant terminé sa conversion en 2007 (et prend comme nom hébreu Ayala (איילה), qui signifie « biche »).

Le couple a deux filles, Olive (née le 17 octobre 2007) et Elula Lottie Miriam (née en août 2010), et un garçon, Montgomery (né le 10 avril 2015).